细胞增殖检测是评估细胞健康程度、遗传毒性及抗肿瘤药物效果的基础实验手段。常用的检测细胞增殖方法是BrdU法。EdU法检测是Brdu方法的升级和突破。EdU（5-溴-2-脱氧尿嘧啶）是一种嘧啶类似物，可在DNA合成期整合入DNA双链。EdU法检测是基于“点击”反应，一种由铜催化的叠氮化合物和炔烃的原子共价反应。

试剂盒中EdU试剂含有炔烃，而Yefluor 594 Azide染料试剂含有叠氮化合物。点击法的EdU标记增殖快速有效，易于使用。只需少量的叠氮化染料即可有效地标记出整合的EdU。标准化的戊二醛固定和去污剂促渗可以使检测试剂进入细胞，而Brdu方法则需要DNA变性（如酸变性、热变性或者用DNase消化）去暴露BrdU从而方便BrdU抗体结合。

本试剂盒包含EdU法检测所需要的所有组份，可以检测细胞增殖与细胞周期分析，适用于荧光显微镜和流式细胞仪检测。对于细胞周期的分析，试剂盒提供了细胞核染料Hoechst 33342。

-25~-15℃避光储存，有效期1年。开封后，组分A（10 mM EdU）需-25~-15℃储存，组分B（Yefluor 594 Azide）需-25 ~-15℃避光储存，其余组分2-8 ℃存储即可。

Q:可以做体外吗？客户样本是组织。细胞样本可以吗？

A: 体外是可以，但是组织不可以，必须要保证能增殖，有DNA 合成。能进行增殖的细胞就可以。

Q: EdU 和Brdu 检测区别？

A: BrdU 免疫检测需要变性DNA 后才能与抗体结合，而 EdU 因为其特有的炔羟基团可以与一些荧光染料发生“Click”化学反应，无需变形，从而将细胞标记上荧光，因此应用更广泛。

Q:能否在活细胞中进行 Click-iT EdU 检测？

A: 不可以。虽然 EdU 是对活细胞进行代谢标记，但是叠氮化物检测试剂和缓冲液组分是细胞非透过型，检测信号时的Click 反应必须在固定和通透的样品上进行。

Q: 观测到较高的本底干扰，这是什么原因所致？如何减少本底干扰？

A: 叠氮化物和炔烃类间 Click 反应非常有选择性，生物体内几乎不可能有副反应发生，所以本底较高一般是由洗涤不充分造成的。减少本底干扰的最佳方法是增加BSA 洗涤的次数。同时， 也可在同样的检测条件下设置一组同等处理的无染料或无Click 反应对照，以排除自发荧光干扰。此外，您还可在无 EdU 体系中进行完整的 Click 反应，验证Click 反应信号的特异性。

Q: 为什么标记样品无信号或特异性信号非常低？如何提高信号？

A:

1. 请保证试剂使用时为无色的状态，不要使用已经变黄的添加剂或缓冲液；
2. 为确保 Click 反应试剂能够到达核内，细胞需要充分地固定和通透；
3. 由于铜离子能结合到部分试剂上，这会导致催化 Click 反应的有效浓度降低。所以在 Click 反应前，不要在任何缓冲液或试剂中引入金属螯合剂（例如 EDTA、EGTA、柠檬酸盐等），对某些含有这些物质的实验样品来说，进行Click 反应前，可能需要增加额外的洗涤步骤；
4. 当铜离子在合适的化合价时，Click 反应才有效。Click 反应中用到的铜离子为二价铜(Cu2+)。
5. 延长Click 反应的时间至超过 30 分钟也并不会提高信号。建议使用新鲜的Click 反应试剂再次进行 30 分钟的孵育，可更有效地提高标记效率。